溶酶體染色試劑盒的基礎(chǔ)知識(shí)，一起學(xué)習(xí)吧！
更新時(shí)間：2018-10-12 點(diǎn)擊次數(shù)：2483
本試劑盒可以用于酶標(biāo)版、免疫組化和流式細(xì)胞技術(shù)等應(yīng)用，用于多種不同類(lèi)型的研究中，包括細(xì)胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性的研究，適用于增殖型和非增殖型細(xì)胞，也可以用于懸浮和貼壁細(xì)胞。
溶酶體染色試劑盒使用方法，準(zhǔn)備溶酶體染色試劑盒，室溫避光放置5-10分鐘預(yù)熱LysoBrite NIR染料Component A取20µL預(yù)熱好的LysoBrite NIR染料(Component A)，用10 mL活細(xì)胞染色緩沖液Component B進(jìn)行稀釋。注意，20μL LysoBrite NIR染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實(shí)驗(yàn)，剩余的LysoBrite NIR染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。優(yōu)染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會(huì)有不同，染色條件根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化。
溶酶體染色試劑盒細(xì)胞染色，貼壁細(xì)胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用 Cy5濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。
溶酶體染色試劑盒是一類(lèi)熒光成像工具，用來(lái)標(biāo)記亞細(xì)胞，細(xì)胞器；例如細(xì)胞膜、溶酶體、線(xiàn)粒體和細(xì)胞核等。Cell Navigator系列細(xì)胞器或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)標(biāo)記試劑盒提供全的細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞器熒光標(biāo)記方案，每種檢測(cè)方案均能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光檢測(cè)方法。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時(shí)間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。注意，如果細(xì)胞沒(méi)有充分染色，可以適當(dāng)增加染料濃度或增加染色時(shí)間進(jìn)行改善。懸浮細(xì)胞: 在1000 rpm 條件下離心細(xì)胞培養(yǎng)液5分鐘，棄去上清，用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)液溫和的重懸細(xì)胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用 Cy5濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。
溶酶體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體，使之帶紅色熒光(Ex/Em =636/650 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，屬趨溶酶體染料，染料滲透進(jìn)入完整的活細(xì)胞中，有選擇性進(jìn)入溶酶體，并因溶酶體膜內(nèi)外的不同pH環(huán)境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進(jìn)入溶酶體中，熒光顯著性增強(qiáng)并非常穩(wěn)定。
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