核線粒體的分離原理:

　　1.通過機(jī)械方法破裂細(xì)胞。

　　2.通過低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞。

　　3.通過高速差速離心獲得線粒體。

　　使用注意事項(xiàng)：

　　1.全程低溫操作，將樣品管放在冰水浴而不是碎冰中。

　　2.快速、微量制備比大規(guī)模制備操作更方便快捷，因而更容易獲得完整的線粒體。

　　3.在不破壞亞細(xì)胞器的情況下、破碎細(xì)胞是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃均漿時較難破壁，因而要選小容量、玻璃均漿器，間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。在相差顯微鏡下檢查未裂解細(xì)胞應(yīng)在50%左右。研磨過度將破壞線粒體。研磨不足會降低得率。

　　4.離心力g計算正確的離心速度，不同離心機(jī)可依據(jù)此計算離心速度。

　　5.進(jìn)行WesternBlot和2D-膠電泳，可直接加入樣品緩沖液裂解線粒體。

　　線粒體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的線粒體，使之帶紅色熒光(Ex/Em=640/659nm)(Cy5filter)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，屬線粒體選擇性染料，該染料能輕易進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，通過線粒體膜電位變化滲透進(jìn)入線粒體，并在線粒體中富集。線粒體染色試劑盒提供了標(biāo)記線粒體的全套試劑，能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨(dú)使用，也支持對細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動提供了一種十分有效的方法。